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貨號:Cat. No.:MD101-1    Size:100ul X 20支

——產品介紹

       SM-DH5α Competent Cell 是華麥生物研發的用特殊化學方制備的DH5α感受態細胞,相比于常規方法制備的感受態細胞,其轉化不需要冰浴、熱激和孵育等步驟,最快能在30秒內完成轉化步驟。轉化步驟多樣性,可以實現30秒,5分鐘及傳統步驟的轉化,效率可達108-109菌落數/ug質粒(pUC19),是實現DNA克隆,文庫構建等實驗的理想產品。

——產品特色

Ø1、 轉化快:最快30秒快速轉化,不需冰浴、熱激和孵育步驟。

Ø2、 效率高:可達到108-109cfu/ug pUC19 DNA。

Ø3、 穩定性好:-70度冰箱可保存一年時間。

SM-DH5a基因型

F-φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169deoRrecA1endA1hsdR17(rk-,mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96relA1

——操作步驟

1)30秒快速轉化

1. 取100ul冰浴上融化的SM-DH5α感受態細胞,加入目的DNA(質?;蛘哌B接產物),輕輕混勻。

2. 向每個離心管中加入200ul無菌的SOC或者LB培養基(不含抗生素),輕柔地混勻。

3. 吸取已轉化的感受態細胞加到含氨芐抗生素的LB瓊脂培養基上,將細胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被稀釋,平板

    倒置,過夜培養。

注意30秒快速轉化的產物是攜帶氨芐抗性的質粒;其他抗性的質粒,開始步驟一致,但加入SOC或LB培養基后,需在

     37℃,200 rmp的搖床上至少孵育30分鐘,然后再涂板。

2)5分鐘轉化

1. 取100ul冰浴上融化的SM-DH5α感受態細胞,加入目的DNA(質?;蛘哌B接產物),輕輕混勻,在冰浴中靜置2分鐘。

2.  42℃水浴中熱激30秒,然后快速將離心管轉移至冰浴中2分鐘,該過程不要振蕩離心管。

3. 向每個離心管中加入200ul無菌的SOC或者LB培養基(不含抗生素),輕柔地混勻。

4. 吸取已轉化的感受態細胞加到含氨芐抗生素的LB瓊脂培養基上,將細胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被稀釋,平板倒置,過夜培養。

注意:5分鐘快速轉化的產物是攜帶氨芐抗性的質粒;其他抗性的質粒,開始步驟一致,但加入SOC或LB培養基后,需在37℃,200 rmp的搖床上至少孵育30分鐘,然后再涂板。

3)傳統轉化步驟

1. 取100ul冰浴上融化的SM-DH5α感受態細胞,加入目的DNA(質?;蛘哌B接產物),輕輕混勻,在冰浴中靜置30分鐘。

2. 42℃水浴中熱激30秒,然后快速將離心管轉移至冰浴中2分鐘,該過程不要振蕩離心管。

3. 向每個離心管中加入900ul無菌的SOC或者LB培養基(不含抗生素),輕柔地混勻后置于37℃,200rpm搖床上孵育1小時,使細菌復蘇。

4. 根據實驗要求,吸取不同體積或者離心濃縮后的已轉化的感受態細胞加入含相應抗生素的LB瓊脂培養基上,將細胞均勻涂開,將平板置于37℃至液體被稀釋,平板倒置,過夜培養。

轉化示意圖轉化迅速,最快30秒即可完成轉化

 

———保存條件

        -70℃保存,干冰運輸,至少1年有效。

——注意事項

1. 剛化凍的感受態細胞效率最高,避免反復凍融;

2. 30秒或5分鐘快速轉化的產物是攜帶氨芐抗性的;其他抗性要加入SOB或者LB培養基,在37℃,200rmp搖床上至少孵育30分鐘;

3. 轉化整個過程要輕柔,避免移液器吹吸。


 

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