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貨號:M10060  E.coli Washing Buffer  45ml
/E.coli Competent Buffer 15ml
貨號:M10200  E.coli Washing Buffer 150ml
/ E.coli Competent Buffer 50ml
——產品介紹
       SM-Speed E.coli Transformation Kit® 是華麥生物研發的可實現快速轉化的感受態細胞制備試劑盒,適用于實驗室多種菌株,特別是 DH5α, JM109, DH10B, XL1-Blue 等。特殊的感受態試劑配方,使轉化效率可達到108-5X109cfu/ug pUC19 DNA,轉化整個過程不需冰浴、熱激和孵育等步驟,最快30秒即可實現完美的轉化。
 ——產品特色
Ø1、 轉化快:最快可30快速轉化,不需冰浴、熱激和孵育步驟。
Ø2、 效率高:達到108-5X109cfu/ug pUC19 DNA。
Ø3、 穩定性好:-70℃冰箱可保存一年時間。
Ø4、 安全性高:不需液氮處理,直接超低溫凍存即可。
——操作步驟
        以50ml的E.coli培養體積為例
—— 感受態細胞制備操作步驟
1. 將0.5ml新鮮過夜培養的E.coli菌接種于50ml SOB培養基中(1:100比例接種),在搖床中以25℃,250 rpm條件下振蕩培
    養,直至OD600nm達到0.4-0.6。
★注意:在25℃,250 rpm振蕩培養可提高感受態細胞的效率;制備感受態的E.coli菌株應處于生長的對數期,即OD600nm
  達到0.4-0.6,大于0.6時的細菌狀態變差,小于0.4時細菌量較少,均不適合制備感受態細胞。
2.將第一步中的E.coli培養基轉移至冰上,冰浴10分鐘預冷細菌。然后在4℃條件下,3000rpm離心10分鐘。
★注意:制備感受態細胞時所有步驟都要在低溫條件下進行,操作時動作要輕柔,不可劇烈地處理E.coli菌體。
3. 棄去離心后的上清,加入15ml E.coli Washing Buffer,輕柔地重懸細菌沉淀;重復實驗步驟2的操作。
4. 徹底地棄去上清,加入5ml E.coli Competent Buffer,輕柔地重懸細菌沉淀。
5. 在冰上以100ul或200ul的體積分裝E.coli的懸浮液,直接凍存感受態細胞至-70℃超低溫冰箱中(勿用液氮處理感受態細胞)。
 
圖示1:感受態細胞制備流程圖
 
——轉化步驟
       多種轉化形式可選:30秒極速轉化;5分鐘快速轉化;常規轉化
圖示2:轉化流程圖
 
 ———保存條件
         低溫運輸,4℃保存,有效期12月。
——注意事項
1. E.coli菌株影響感受態效率
     不同的菌株制備的感受效率差異不同,像DH5α,JM109, DH10B,XL1-Blue ,XL10 Gold, TG1等菌株,使用SM-Speed E.coli Transformation Kit制備的感受態效率較高。
2. 菌株培養條件
      菌株培養時,用營養更豐富的SOB培養基;在25℃,250rpm振蕩培養,會使E.coli菌處于最佳生長狀態,更適宜用于制備感受態細胞。
3. 預熱平板可提高轉化效率
      在轉化前,將4℃保存的平板轉移到37℃培養箱中預熱一段時間,可提高轉化時的效率。
4. 轉化時加入SOC培養基
      在做轉化實驗時,加入營養豐富的SOC培養基至DNA-感受態轉化混合液中,增強感受態細胞的生長及吸收DNA的能力。
附錄:
SOB培養基配制
1. 組份濃度:2%(W/V)Tryptone;0.5%(W/V)Yeast Extract;0.05%(W/V)NaCl;2.5 mM  KCl;10 mM MgCl2
2. 配制方法:
①、配制250 mM KCl溶解:在90 ml的去離子水中溶解1.86 g KCl后,定容至100 ml。
②、配制2 M MgCl2溶液:在90 ml去離子水中溶解19 g MgCl2后,定容至100 ml,高溫高壓滅菌。
③、稱取下列試劑,置于1 L燒杯中:Tryptone 20g;Yeast Extract 5g;NaCl 0.5 g。
④、加入約800 ml的去離子水,充分攪拌溶解。
⑤、量取10 ml 250 mM KCl溶解,加入到燒杯中。
⑥、滴加5 N NaOH(約0.2 ml),調節pH值至7.0。
⑦、加去離子水將培養基定容至1 L。
SOC培養基配制
1. 配制1M葡萄糖溶液:在90ml去離子水中溶解18g葡萄糖,充分溶解后定容至100ml,用0.22um濾器過濾除菌。
2. 向100ml SOB培養基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2ml,均勻混合。
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